Метод агаровых культур обычно служит для выявления достаточно коммитированных клеток-предшественников гранулоцитарного ряда. Однако, так как лейкемическая трансформация, очевидно, происходит в менее дифференцированных клетках, важно разрабатывать и применять методы, позволяющие выявлять популяцию таких злокачественно измененных самоподдерживающихся лейкозных стволовых клеток. С этой целью предложены методы суспензионных культур клеток, с помощью которых удается получать различные, постоянно растущие в таких культурах линии клеток из костного мозга и крови больных лейкозом. Другим подходом может служить использование краткосрочных культур клеток, которые, по имеющимся данным, содержат высокий процент недифференцированных лейкемических клеток. Читать полностью »
Для диагностики и оценки прогноза лейкоза человека большое значение приобретает использование биохимических маркеров клеток. В последние годы с этой целью применяются биохимические и цитологические методы выявления терминальной трансферазы (терминальной дезоксинуклеотидил трансферазы), присутствие которой характерно для ранних предшественников лимфоидных Т-клеток. Вначале этот фермент был выделен из лимфоцитов тимуса и является специфическим для них. Затем его обнаружили в лимфобластах больных острым лимфобластным лейкозом (McCaffrey е. а., 1975; Sarn е. а., 1976). Функционирует он при наличии коротких матриц - затравок и дезокситрифосфатов - в отсутствие матрицы. Наличие этого фермента в клетках свидетельствует об их принадлежности к предшественникам Т-лимфоцитов, что позволяет отличать острый лимфобластный лейкоз от других острых лейкозов. Читать полностью »
Благодаря современным методическим возможностям появились данные о внутриклеточной локализации специфической вирусной ДНК. В отношении РНК-содержащих онкогенных вирусов показано, что их генетическая информация может существовать как в свободном плазмидном, так и интегрированном состояниях. В работе Markham и соавторов (1973) представлены сведения о внутриклеточной локализации онкорнавирусной специфической ДНК. При этом исследовались нормальные клетки, вируспродуцирующие лейкемические миелобласты, трансформированные вирусом птичьего миелобластоза, и непродуцирующие вирус клетки. Используя метод гибридизации, авторы показали наличие в ядре вирусоспецифических нуклеотидных последовательностей в ДНК, а также установили, что вирусная ДНК является двунитчатой молекулой, ковалентно связанной с высокомолекулярной клеточной ДНК, преципитирующей и седементирующей вместе с ней. Читать полностью »
В связи с успехами, достигнутыми и последние годы в изучении нормального кроветворения, разработке новых методов и подходов выявления и исследования свойств и регуляции стволовых кроветворных клеток и клеток-предшественников различных ростков кроветворения, открылись принципиально новые возможности в изучении механизма развития лейкоза. Особенно это важно для расшифровки начальных нарушений крове творения в процессе лейкозогенеза, Появившиеся новые представления о стволовоклеточных аспектах лейкозогенеза акцентируют внимание на изучении роли стволовых кроветворных клеток в становлении лейкозного процесса Многочисленные данные об этиологических лейкемогенных факторах, с помощью которых можно индуцировать лейкоз в эксперименте и проследить в динамике различные этапы его развития, способствуют проведению исследований, направленных на изучение механизмов злокачественной трансформации клеток при этом заболевании. Читать полностью »
Поскольку лейкозные клетки реагируют на регулирующие факторы микроокружения клеток и другие регуляторные воздействия подобно нормальным клеткам предшественникам и имеется достаточно фактов про явлений дифференциации их в направлении эритропоэза гранулопоэза, а иногда и лимфопоэза при ХМЛ и ОМЛ то все это, по мнению Tll (1976), также свидетельствует о том, что клетками мишенями для лейкозной трансформации являются нормальные полипотентные стволовые клетки. Вышеприведенные данные являются предпосылкой для научения способности лейкозных клеток к дифференциации, В свою очередь, разработка методов культур ткани для выявления продукции вирусных частиц человеческими лейкозными клетками является серьезным шагом в направлении прямой идентификации лейкемических клеток-мишеней у человека (Gallo, 1975; Tll, 1976), Читать полностью »
В ряде работ (Worton е. а,, 1969; Moore е. я,, 1974) подробно описываются методы разделения клеток костного мозга в норме и патологии, М. Мур и Д. Меткалф (1973) подчеркивают, что наиболее эффективный путь выявления свойств клеток и различий между клеточными популяциями - это их физическое разделение, С помощью этих методов (Worton е. а,, 1969) удается отделить стволовые кроветворные клетки костного мозга, дающие образование колоний в селезенке летально облученных животных от колониеобразующих клеток культур. Клетки разделяли на несколько фракций в зависимости от их плотности путем центрифугирования в линейном градиенте плотности 14-37%-иого бычьего сывороточного альбумина (V фракция). В результате подсчета в каждой фракции общего количества клеток и отдельно КОЕ дана (Hyp, Меткалф, 1973) характеристика колониеобразующих клеток культур по плотности и по величине. Читать полностью »
Для определения кинетического состояния стволовых кроветворных клеток и других морфологически нераспознаваемых клеток-предшественников, выявления их пролиферативных способностей используются приемы, направленные на подавление или уничтожение клеток в фазе синтеза ДНК, S-фазе клеточного цикла. Наиболее часто как при исследовании в организме, так и в культуре ткани применяют высокоспецифическое по отношению к синтезу ДНК соединение - меченый тритием тимидин, который убивает клетки в S-фазе, что и определило название метода как тимидиновое самоубийство (Becker е. а., 1965). Определение числа выживших клеток дает возможность определить количество пролиферирующих клеток. Кроме тимидина маркером S-фазы может быть также меченный иодом или тритием уридин, а также оксимочевина, которая предотвращает вхождение клеток в S-фазу и убивает клетки, находящиеся в этой фазе (Lord е. а., 1974). Читать полностью »