При исследовании в световом микроскопе окрашенных по Май-Грюнвальду - Романовскому образцов костного мозга мышей, взятых через указанные выше промежутки времени после введения оксимочевины, была выявлена закономерная корреляция между изменением колониеобразования и процентным содержанием лимфо-цитолодобных клеток трансплантированного костного мозга. К лимфоцитоподобным клеткам относили как типичные лимфоциты, так и все другие мононуклеазы, которые по своему строению, определяемому в световом микроскопе, имели сходство с ними. Следует отметить, что через 36 ч после введения оксимочевины в образцах костного мозга с высокой колониеобразующей способностью, а также во фракции костного мозга, полученной в этот срок исследования дифференциальным центрифугированием, в градиенте плотности альбумина появляется значительное число окрашивающихся в пурпурный цвет клеток, подобных лимфоцитам, но отличающихся от них только несколько большим размером и более гомогенной структурой хроматина ядра. Читать полностью »
Описаны отклонения в созревании и пролиферации лейкозных клеток, которые могут иметь диагностическое значение при остром лейкозе. На основании способности к росту клеток в культурах предложена функциональная классификация острой миелоидной лейкемии, позволяющая выявлять больных, чувствительных и рефрактерных к терапии, предсказать предстоящую ремиссию или обострение. При хронической лейкемии эти методы позволяют установить наступление бластного криза. Читать полностью »
Исключительно важное значение при лейкозе имело применение цитогенетических методов исследования благодаря которым доказана способность к пролиферации и определенной степени дифференциации в культурах именно лейкозных клеток. Для отличия колоний, происходящих из лейкозных и нормальных кроветворных клеток-предшественников, решающее значение имеют цитогенетические маркеры. Поэтому рядом авторов про ведено изучение анеуплоидных метафазных клеток при лейкозе. Многочисленные исследования в этом направлении проведены Moore и соавторами (1974 - 1976). Ими описаны цитогенетические нарушения в клетках колоний, полученных от пациентов с острой миелобластной лейкемией (ОМЛ). При этом продемонстрирована способность клеток лейкемического клона с маркерными изменениями хромосом расти в условиях культур. Этими исследователями отмечен также выраженный дефект в созревании колониеобразующих клеток в культурах при лейкозе и в колониях, возникающих из мало дифференцированных клеток крови. Читать полностью »
Метод агаровых культур обычно служит для выявления достаточно коммитированных клеток-предшественников гранулоцитарного ряда. Однако, так как лейкемическая трансформация, очевидно, происходит в менее дифференцированных клетках, важно разрабатывать и применять методы, позволяющие выявлять популяцию таких злокачественно измененных самоподдерживающихся лейкозных стволовых клеток. С этой целью предложены методы суспензионных культур клеток, с помощью которых удается получать различные, постоянно растущие в таких культурах линии клеток из костного мозга и крови больных лейкозом. Другим подходом может служить использование краткосрочных культур клеток, которые, по имеющимся данным, содержат высокий процент недифференцированных лейкемических клеток. Читать полностью »
Для диагностики и оценки прогноза лейкоза человека большое значение приобретает использование биохимических маркеров клеток. В последние годы с этой целью применяются биохимические и цитологические методы выявления терминальной трансферазы (терминальной дезоксинуклеотидил трансферазы), присутствие которой характерно для ранних предшественников лимфоидных Т-клеток. Вначале этот фермент был выделен из лимфоцитов тимуса и является специфическим для них. Затем его обнаружили в лимфобластах больных острым лимфобластным лейкозом (McCaffrey е. а., 1975; Sarn е. а., 1976). Функционирует он при наличии коротких матриц - затравок и дезокситрифосфатов - в отсутствие матрицы. Наличие этого фермента в клетках свидетельствует об их принадлежности к предшественникам Т-лимфоцитов, что позволяет отличать острый лимфобластный лейкоз от других острых лейкозов. Читать полностью »
В ряде работ показано, что синтез копий вирусной ДНК на РНК осуществляется на самых ранних стадиях взаимодействия РНК-содержащего вируса с клетками буквально через час после заражения вирусом (Dales, Hanafuas, 1972). Детальные исследования внутриклеточного синтеза вирусной ДНК и ее интеграции с клеточной ДНК проведены в культурах ткани, инфицированных вирусами сарком и лейкоза птиц (Baluda, 1974). Синтез провирусной ДНК наблюдали в течение первого часа после инфицирования клеток. Отмечалось многократное увеличение содержания этой ДНК в инфицированных клетках в начальной стадии взаимодействия вируса с клетками. Вновь синтезированную вирусную ДНК определяли гибридизацией с 70S вирусной РНК. Авторы предполагают, что копии ДНК синтезируются как индивидуальные транскрипты 35S субъединиц вирусной РНК. В последующем только часть синтезированной вирусной ДНК ковалентно связывается с высокомолекулярной клеточной ДНК в течение 24 ч. Остальная ДНК растворяется и деградирует в клетке. Читать полностью »
Анализируя имеющиеся данные, следует подчеркнуть, что в последние годы достигнут значительный прогресс в представлениях о вирусном канцеро- и лейкозогенезе на основе молекулярно-биологических исследований. И в настоящее время очень важным является накопление информации о внутриклеточных изменениях, происходящих на ранних этапах злокачественной трансформации клеток, В первую очередь это касается нарушений метаболизма, структуры и свойств макромолекул в клетках под влиянием известных онкогенных и лейкемогенных вирусов, поисков на этой основе вирусов и вирусного генома в клетках при лейкозе человека и других опухолях, изучения механизма интеграции вирусного генома с клеточным и в целом расшифровки механизма превращения генома нормальных клеток в геном злокачественных клеток. Читать полностью »