Гипотеза о существовании ДНК посредника или ДНК провируса в репликации РНК-содержащих вирусов находит прямое подтверждение в опытах по трансфекции продемонстрировавших инфекционность ДНК, выделенной из клеток, трансформированных рибодезоксивирусами, а также данными по гибридизации вирусной РНК с ДНК инфицированных клеток. Hll, Hllova (1976) впервые было показано, что добавление к нормальным клеткам очищенной ДНК, полученной из клеток, трансформированных вирусом саркомы Рауса, приводит к продукции этого вируса и злокачественной трансформации клеток. В последовавших за этим сообщением работах находит подтверждение факт инфекционности ДНК клеток, трансформированных другими рибодезоксивирусами, в частности лейкемогенными (Nooter е. а., 1976). Читать полностью »
Благодаря современным методическим возможностям появились данные о внутриклеточной локализации специфической вирусной ДНК. В отношении РНК-содержащих онкогенных вирусов показано, что их генетическая информация может существовать как в свободном плазмидном, так и интегрированном состояниях. В работе Markham и соавторов (1973) представлены сведения о внутриклеточной локализации онкорнавирусной специфической ДНК. При этом исследовались нормальные клетки, вируспродуцирующие лейкемические миелобласты, трансформированные вирусом птичьего миелобластоза, и непродуцирующие вирус клетки. Используя метод гибридизации, авторы показали наличие в ядре вирусоспецифических нуклеотидных последовательностей в ДНК, а также установили, что вирусная ДНК является двунитчатой молекулой, ковалентно связанной с высокомолекулярной клеточной ДНК, преципитирующей и седементирующей вместе с ней. Читать полностью »
Комплекс 70S РНК и обратной транскриптазы обнаружен благодаря применению специально разработанной методики в лейкоцитах у 96% обследованных больных острым лейкозом. Эта РНК гомологична РНК вируса Раушера и на ней осуществляется синтез ДНК. Подобный комплекс обнаружен также в плазме 74% больных лейкозом при полном его отсутствии у здоровых (Yanv, 1973). Дальнейшими исследованиями показано, что вышеописанный комплекс находится в частицах с плотностью 1,16-1,19 г/мл (Baxt, 1972), характерной для вирусных частиц животных. Они были использованы для доказательства наличия вирусспецифической информации в геноме лейкоцитов человека. Для этого на описанных комплексах, состоящих из РНК и фермента, синтезировали меченую ДНК для проб с молекулярной гибридизацией. Авторы установили важный факт, что ядерная ДНК лейкемических клеток содержит вирусспецифические последовательности, отсутствующие в нормальных лейкоцитах. Читать полностью »
В ряде работ показано, что синтез копий вирусной ДНК на РНК осуществляется на самых ранних стадиях взаимодействия РНК-содержащего вируса с клетками буквально через час после заражения вирусом (Dales, Hanafuas, 1972). Детальные исследования внутриклеточного синтеза вирусной ДНК и ее интеграции с клеточной ДНК проведены в культурах ткани, инфицированных вирусами сарком и лейкоза птиц (Baluda, 1974). Синтез провирусной ДНК наблюдали в течение первого часа после инфицирования клеток. Отмечалось многократное увеличение содержания этой ДНК в инфицированных клетках в начальной стадии взаимодействия вируса с клетками. Вновь синтезированную вирусную ДНК определяли гибридизацией с 70S вирусной РНК. Авторы предполагают, что копии ДНК синтезируются как индивидуальные транскрипты 35S субъединиц вирусной РНК. В последующем только часть синтезированной вирусной ДНК ковалентно связывается с высокомолекулярной клеточной ДНК в течение 24 ч. Остальная ДНК растворяется и деградирует в клетке. Читать полностью »
В Советском Союзе исследования по изучению противолейкозной активности естественных регуляторов кроветворения интенсивно развиваются академиком Н, Л. Федоровым и сотрудниками, При этом используются продукты жизнедеятельности нормальных кроветворных клеток, гранулоцитопоэтических веществ, эритропоэтина и др. В процессе изучения влияния на кроветворение при лейкозе эритропоэтина в экспериментах на мышах показано обострение заболевания, которое связывается с неспецифическим его действием на клеточный рост. Введение же животным антиэритропоэтической иммунной сыворотки, нейтрализующей эритропоэтин, сопровождается торможением лейкозного процесса и нормализацией кроветворения (Федоров, Рещиков, 1976). Читать полностью »
В этиологии лейкоза большую роль играют онкорнавирусы, в связи с чем особый интерес представляет установление значения родоначальных кроветворных клеток при вирусном лейкозогенезе, изучение их роли как клеток-мишеней для действия лейкемогенных вирусов, выявление особенностей молекулярно-генетических изменений и нарушений дифференциации клеток при взаимодействии вирусов с клетками, экспрессии вирусного генома в различных категориях клеток. Это, в свою очередь, будет способствовать выяснению биологической роли онкогенных вирусов в организме вообще. На основании данных о полипотентных стволовых кроветворных клетках проводятся интенсивные исследования по изучению стволовых клеток других пролиферирующих тканей. Значительные успехи достигнуты в выделении стволовых клеток эпидермиса, печени, кишечника, тестис и показано их значение в канцерогенезе. Установлена большая роль стволовых клеток печени в гепатоканцерогенезе, ведущее значение стволовых энтероцитов в возникновении опухолей кишечника. Поиски новых путей нормализации и повышения дифференциации лейкозных и других злокачественно измененных клеток зависят от дальнейшего успеха в изучении стволовых клеток различных тканей. Читать полностью »
Эти и другие данные позволяют рассматривать полипотентные стволовые клетки как клетки-мишени для действия лейкемогенных вирусов, хотя при этом не исключено и непосредственное их влияние на другие клетки-предшественники и внеклеточные регуляторные механизмы. Для мышиного лейкоза Раушера характерна ранняя пролиферация эритробластных клеток в селезенке, поэтому высказывается предположение, что при этом лейкозе прежде всего поражаются клетки-предшественники эритроидного ряда. При лейкозе Фрейд описано появление новых предшественников эритроидного ряда, которые отличаются тем, что они эритропоэтино-чувствительны. Этот факт сам по себе свидетельствует об опухолевой природе клеток-предшественников при лейкозе, хотя, сопоставляя эти и другие данные, логично предположить первичное поражение при лейкозе общего предшественника клеток крови. Читать полностью »