СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ

На примере дифференциации тотипотентных клеток в направлении гранулоцитопоэза и эритропоэза Tll (1976) продемонстрирована возможность прогрессивного ограничения проявления одних маркеров и экспрессии других, характерных для определенной направленности гемопоэза в процессе дифференциации стволовых клеток, В результате этого образуются зрелые клетки эритроцитарного и гранулоцитарного рядов с четкими маркерными признаками. Эти представления, естественно, важны как для рассмотрения вопросов регуляции стволовых кроветворных клеток, так и их идентификация. Читать полностью »

Другой подход для электронно-микроскопической идентификации полипотентных стволовых кроветворных клеток был избран Rubnsten и Trobaugh (1973). С этой целью авторы использовали свойство ГСК сохранять жизнеспособность после глубокого охлаждения и оттаивания. Так, было показано, что в суспензии костного мозга мышей, охлажденной до -100 С и оттаянной с помощью защитной техники, большая часть зрелых клеток крови разрушается, но репопуляциониая активность ее снижается менее чем на 5%, что дает возможность легче обнаружить ГСК. По данным этих авторов, предполагаемые ГСК круглые или овальные клетки, по величине около 8 мкм. В них содержится круглое или овальное ядро с волнистым контуром, в котором могут обнаруживаться единичные нуклеолы. Узкий ободок цитоплазмы содержит многочисленные рибосомы и несколько небольших круглых или овальных митохондрий, которые обычно располагаются в складках ядерной мембраны. Встречаются также короткие профили шероховатого эндоплазматического ретикулума и везикулы. Очень редко выявляется аппарат Гольджи. Следовательно, предполагаемые ГСК, описанные этими авторами, по своей ультраструктуре несколько отличаются от описанных предыдущими авторами, больше приближаясь к лимфоидным клеткам. Читать полностью »

Возможно, при лейкозе происходят нарушения смешанного характера, но это гипотезы, В настоящее время важно определить основные события, происходящие в процессе лейкозной трансформации клеток. Эти вопросы могут быть выяснены на основании разностороннего изучения стволовых клеток с помощью разработанных новых методических приемов, о чем шла речь в предыдущей главе, что и предпринимается многими учеными. Ряд экспериментальных данных довольно определенно свидетельствует о том, что при лейкозе быстро вовлекаются в процесс и поражаются полипотентные стволовые клетки. Это, в первую очередь, исследования, свидетельствующие об изменении их числа, пролиферации и некоторых других свойств под влиянием лейкемогенных вирусов. В связи с этими фактами и определенными клиническими наблюдениями создалось представление о стволовоклеточных аспектах лейкозогенеза, интенсивно развивающееся в настоящее время. Читать полностью »

Следует коснуться также влияния БЦЖ на гемопоэтические клетки мышей в норме и после различных воздействий и восстановления гемопоэза у людей, получавших цикловую химиотерапию. В многочисленных исследованиях (Poullart е. а., 1976) показано, что после введения БЦЖ здоровым мышам наблюдалось заметное увеличение процента. КОЕс в S-фазе через 8 ч; внутривенное введение БЦЖ также увеличивало абсолютное число КОЕк. Ее влияние отличается от действия бактериального эндотоксина, в частности она не вызывает увеличения уровня КСФ. При введении БЦЖ за 24 ч до облучения летальной дозой наблюдался защитный эффект и удлинение жизни животных. Введение ее после облучения не вызывало никакого защитного эффекта. На основании полученных данных авторы приходят к заключению, что БЦЖ вызывает так называемый центральный эффект, т. е. действует прямо на КОЕ0, находящиеся в фазе покоя, стимулируя их выход в активную фазу клеточного цикла; после химиотерапии восстановление клеток костного мозга происходит без индуцирования увеличения резервного пула. Читать полностью »

Учитывая вышеизложенное, в выполненных нами исследованиях на мышах линии СмВL и BALBc свеже-синтезированную оксимочевину в количестве 500 мг на 1 кг веса вводили животным 3 раза с интервалом 4- б ч. Через 36 ч после последнего введения их забивали, готовили суспензию костномозговых клеток и в количестве 10 -10е вводили в хвостовую вену летально облученным мышам для определения колониеобразующей способности по классической методике Tll и McCuoch (1961), В контроле облученным животным вводили такое же количество клеток костного мозга интактных мышеи. Из клеточных суспензий костного мозга готовили препараты для электронной и световой микроскопии (Вутенко в др., 1974; Зак, 1977). В ряде опытов костномозговые клетки подвергали дифференциальному центрифугированию в градиенте плотности альбумина и исследовали обогащенную стволовыми клетками фракцию клеток, выделенных в 21%-ном растворе бычьего альбумина, С целью дифференциации клеток моноцитариого ряда проводили ультрацитохимическое определение активности пероксидазы (Graham, Karooveky, 1966). Читать полностью »

С целью устранения возможной примеси Т-лимфоцитов в результате их иммиграции из циркуляции крови в костный мозг в исследуемых образцах клетки обрабатывали высокоспецифической по отношению к ним антисывороткой. Под ее воздействием нарушается около 5-7 % лимфоидных клеток, в основном имеющих плотный матрикс цитоплазмы, характерный для Т-лимфоцитов. Эта же сыворотка приводит к деструкции более 80% тимоцитов. Сыворотка не оказывала никакого влияния на В-лимфоциты и колониеобразующие клетки. Для выявления и дифференциации атипичных моноцитов и других фагоцитирующих клеток проводили инкубацию суспензии клеток костного мозга с частичками латекса диаметром 0,3 мкм. Читать полностью »

В плане фракционирования кроветворных клеток важное значение имеет разработка новых приемов разделения клеток крови. Большой интерес представляют данные (Schubert, Walther, 1974) о применении электрофоретического препаративного выделения различных кроветворных клеток, причем не только у животных, но и человека, с помощью нового аппарата для свободного плавучего электрофореза. Авторами установлена электрофоретическая подвижность для различных категорий клеток-предшественников, что позволяет дополнительно характеризовать кроветворные клетки в норме и при лейкозе. Большие возможности, представляемые методами фракционирования, использованы для идентификации родоначальных клеток, однако полученные при этом с помощью светового микроскопа данные о морфологических свойствах клеток и их трактовка оказались не совсем идентичными. Читать полностью »