Другой подход для электронно-микроскопической идентификации полипотентных стволовых кроветворных клеток был избран Rubnsten и Trobaugh (1973). С этой целью авторы использовали свойство ГСК сохранять жизнеспособность после глубокого охлаждения и оттаивания. Так, было показано, что в суспензии костного мозга мышей, охлажденной до -100 С и оттаянной с помощью защитной техники, большая часть зрелых клеток крови разрушается, но репопуляциониая активность ее снижается менее чем на 5%, что дает возможность легче обнаружить ГСК. По данным этих авторов, предполагаемые ГСК круглые или овальные клетки, по величине около 8 мкм. В них содержится круглое или овальное ядро с волнистым контуром, в котором могут обнаруживаться единичные нуклеолы. Узкий ободок цитоплазмы содержит многочисленные рибосомы и несколько небольших круглых или овальных митохондрий, которые обычно располагаются в складках ядерной мембраны. Встречаются также короткие профили шероховатого эндоплазматического ретикулума и везикулы. Очень редко выявляется аппарат Гольджи. Следовательно, предполагаемые ГСК, описанные этими авторами, по своей ультраструктуре несколько отличаются от описанных предыдущими авторами, больше приближаясь к лимфоидным клеткам. Читать полностью »
Описано также увеличение количества клеток-предшественников миелоидного ряда, находящееся во взаимосвязи с пролиферацией стволовых клеток в предлейкемический период при развитии спонтанного лейкоза у мышей линии AKR (Hays e. a., 1976). На основании этих данных можно считать, что после действия вируса на полипотентные клетки, являющиеся по отношению к нему клетка ми-мишенями, происходит интенсивный и ускоренный переход полипотентных клеток в последующие стадии дифференциации. О повреждении стволовых клеток свидетельствует потеря ими способности к колониеобразованию. Читать полностью »
Учитывая вышеизложенное, в выполненных нами исследованиях на мышах линии СмВL и BALBc свеже-синтезированную оксимочевину в количестве 500 мг на 1 кг веса вводили животным 3 раза с интервалом 4- б ч. Через 36 ч после последнего введения их забивали, готовили суспензию костномозговых клеток и в количестве 10 -10е вводили в хвостовую вену летально облученным мышам для определения колониеобразующей способности по классической методике Tll и McCuoch (1961), В контроле облученным животным вводили такое же количество клеток костного мозга интактных мышеи. Из клеточных суспензий костного мозга готовили препараты для электронной и световой микроскопии (Вутенко в др., 1974; Зак, 1977). В ряде опытов костномозговые клетки подвергали дифференциальному центрифугированию в градиенте плотности альбумина и исследовали обогащенную стволовыми клетками фракцию клеток, выделенных в 21%-ном растворе бычьего альбумина, С целью дифференциации клеток моноцитариого ряда проводили ультрацитохимическое определение активности пероксидазы (Graham, Karooveky, 1966). Читать полностью »
Как показано в последние годы, в процессе дифференциации кроветворных клеток происходят сложные молекулярные внутриклеточные нарушения, связанные в первую очередь с изменением синтеза ДНК, информационных и других РНК, специфических белков. Исследования в атом отношении имеют огромное значение не только для понимания механизма контроля нормального кроветворения, но и нарушения кроветворения при лейкозе и других заболеваниях системы крови. Читать полностью »
В связи с открывшимися большими возможностями современной науки следует признать правильной существующую тенденцию многих ученых, нацеленную на попытки идентификации стволовых клеток и клеток-предшественников. Решение этого вопроса находится не пути дальнейшего усовершенствования цитологических и молекулярно-биологических методических приемов, дающих возможность получать фракции, сознательно обогащенные стволовыми клетками, и изучать их на ультраструктурном и ультрацитохимическом уровнях, внедрение в практику гематологических исследований электронной микроскопии, ультраструктурной цитохимии и электронно-микроскопической иммунологии приобрело огромное значение. Благодаря этим методам стало возможным идентифицировать кровяные клетки на уровне их органоидов - величины, расположения, субмикроскопического строения, а также внутриклеточного обмена, наличия или отсутствия рецепторов или маркеров. Разработанные в самые последние годы методы трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии с использованием различных иммунологических меток следует считать чрезвычайно перспективными для решения рассматриваемого вопроса. Читать полностью »
При детальном морфологическом исследовании с использованием новейших методов электронной микроскопии ультраструктурой цитохимии и иммунохимии, а также авторадиографии лимфоцитоподобные мононуклеары костного мозга мышей мы условно разделяем на 8 видов: 1) предполагаемые стволовые клетки 1-го вида-по своей ультра структуре близки к клеткам, описанным Bekkum и соавторами (1971); 2) предполагаемые колониеобразующие клетки 2-го вида, описанные Rubnsten и Trobaugh (1973) и нами (Кавецкий и др., 1974); 3) бласты с мозаичным ядром (Х-клетки); 4) неспециализированные бластные клетки, не имеющие четких морфологических признаков лимфобласта, и моложе их; 5) лимфобласт; 6) типичные малые лимфоциты костного мозга (костномозгоциты); 7) микролимфоциты- лимфоциты очень маленького размера (диаметр клетки 3 - 4 мкм); 
плазматические. Читать полностью »
Дальнейшие перспективы морфологического изучения кроветворных клеток-предшественников связаны с совершенствованием методических приемов, открывших новые возможности для их распознавания. Это прежде всего разработка более эффективных методов обогащения кроветворных органов стволовыми клетками с помощью различных химических и физических воздействий; усовершенствование методических приемов разделения клеток костного мозга, лимфоидных органов, крови с целью получения фракций, максимально обогащенных колониеобразующими клетками; разработка н использование различных маркеров для специфической метки стволовых и коммитированных клеток-предшественников; устранение клеток, морфологически сходных со стволовыми, при сохранении последних с помощью различных физических, гормональных и других воздействий; применение новейших методов трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии высокой разрешающей способности, цитохимии, ультрацитохимии, авторадиографии и иммунологии для распознавания кроветворных клеток и изучения их свойств. Читать полностью »