Другой подход для электронно-микроскопической идентификации полипотентных стволовых кроветворных клеток был избран Rubnsten и Trobaugh (1973). С этой целью авторы использовали свойство ГСК сохранять жизнеспособность после глубокого охлаждения и оттаивания. Так, было показано, что в суспензии костного мозга мышей, охлажденной до -100 С и оттаянной с помощью защитной техники, большая часть зрелых клеток крови разрушается, но репопуляциониая активность ее снижается менее чем на 5%, что дает возможность легче обнаружить ГСК. По данным этих авторов, предполагаемые ГСК круглые или овальные клетки, по величине около 8 мкм. В них содержится круглое или овальное ядро с волнистым контуром, в котором могут обнаруживаться единичные нуклеолы. Узкий ободок цитоплазмы содержит многочисленные рибосомы и несколько небольших круглых или овальных митохондрий, которые обычно располагаются в складках ядерной мембраны. Встречаются также короткие профили шероховатого эндоплазматического ретикулума и везикулы. Очень редко выявляется аппарат Гольджи. Следовательно, предполагаемые ГСК, описанные этими авторами, по своей ультраструктуре несколько отличаются от описанных предыдущими авторами, больше приближаясь к лимфоидным клеткам. Читать полностью »
В настоящее время различными авторами при использовании различных лейкемогенных вирусов мышей установлена определенная закономерность нарушений на уровне родоначальных клеток крови. Показано, что под влиянием широко распространенных и применяемых в эксперименте вирусов, вызывающих лейкоз, очень скоро происходит повреждение или депрессия пролиферации полипотентных стволовых клеток костного мозга у инфицированных животных. Это проявляется в очень быстром и значительном снижении их количества в костном мозге и селезенке (Sedel, 1972-1977; Wu e. a., 1974; Okunewck, Chervenck, 1977; Кавецкий, Бутенко, 1977). Первоначальные изменения в содержании стволовых клеток, происходящие в первые сутки после введения активного вируса, находят свое отражение в последующих количественных и качественных изменениях различных костномозговых клеток я клеток крови. Читать полностью »
В специальных опытах изучалось изменение количества и синтеза ДНК в кроветворных клетках в первые сутки после заражения мышей лейкемогенным вирусом Раушера или у крыс после введения РНК, выделенной из лейкозных клеток вирусного крысиного лейкоза Швеца. Для этих целей применяли методы адсорбционной цитоспектрофотометрии и авторадиографии, позволяющие не только выявить изменения в клетках синтеза РНК или ДНК и пролиферативной активности кроветворных клеток, но и оценить потенциальную способность клеток к делению. Читать полностью »
Следует коснуться также влияния БЦЖ на гемопоэтические клетки мышей в норме и после различных воздействий и восстановления гемопоэза у людей, получавших цикловую химиотерапию. В многочисленных исследованиях (Poullart е. а., 1976) показано, что после введения БЦЖ здоровым мышам наблюдалось заметное увеличение процента. КОЕс в S-фазе через 8 ч; внутривенное введение БЦЖ также увеличивало абсолютное число КОЕк. Ее влияние отличается от действия бактериального эндотоксина, в частности она не вызывает увеличения уровня КСФ. При введении БЦЖ за 24 ч до облучения летальной дозой наблюдался защитный эффект и удлинение жизни животных. Введение ее после облучения не вызывало никакого защитного эффекта. На основании полученных данных авторы приходят к заключению, что БЦЖ вызывает так называемый центральный эффект, т. е. действует прямо на КОЕ0, находящиеся в фазе покоя, стимулируя их выход в активную фазу клеточного цикла; после химиотерапии восстановление клеток костного мозга происходит без индуцирования увеличения резервного пула. Читать полностью »
Учитывая вышеизложенное, в выполненных нами исследованиях на мышах линии СмВL и BALBc свеже-синтезированную оксимочевину в количестве 500 мг на 1 кг веса вводили животным 3 раза с интервалом 4- б ч. Через 36 ч после последнего введения их забивали, готовили суспензию костномозговых клеток и в количестве 10 -10е вводили в хвостовую вену летально облученным мышам для определения колониеобразующей способности по классической методике Tll и McCuoch (1961), В контроле облученным животным вводили такое же количество клеток костного мозга интактных мышеи. Из клеточных суспензий костного мозга готовили препараты для электронной и световой микроскопии (Вутенко в др., 1974; Зак, 1977). В ряде опытов костномозговые клетки подвергали дифференциальному центрифугированию в градиенте плотности альбумина и исследовали обогащенную стволовыми клетками фракцию клеток, выделенных в 21%-ном растворе бычьего альбумина, С целью дифференциации клеток моноцитариого ряда проводили ультрацитохимическое определение активности пероксидазы (Graham, Karooveky, 1966). Читать полностью »
Benshay (1974, 1975) было показано, что в экранированной конечности выживших после смертельного облучения крыс или крыс, получавших оксимочевину, наблюдается резкое увеличение числа лимфоидных клеток, часть которых именуется транзиторными, по своему субмикроскопическому строению они весьма сходны с описанным выше (Бутенко и др., 1975) вторым типом предполагаемых стволовых клеток. Увеличение количества подобных клеток (Benshay, 1975) через 6 ч после введения крысам оксимочевины дает возможность автору рассматривать эту модель как удачную для изучения родоначальных кроветворных клеток у этих животных. Everett H.Perkns (1976) при исследовании миграции клеток из защищенного участка конечности одной из облученных крыс, находящихся в парабиозе, а также после обильного кровотечения пришли к выводу, что полипотентные стволовые кроветворные клетки представляют собой группу клеток, отличающихся как от лимфоцитов, так и от клеток моноцитарно-макрофагального ряда. Читать полностью »
Максимального снижении относительного и абсолютного количества лимфоцитов в костном мозге можно достичь только при многократном ежедневном применении больших доз глюкокортикоидов. При этом после первой инъекции гормона наступают значительные характерные изменения в лимфоцитах, с последующей их деструкцией и поглощением макрофагами. Максимальное снижение лимфоцитов в костном мозге наступает через 24 -72 ч после последнего введения гидрокортизона. Несмотря на снижение количества лимфоцитов, костный мозг обладает высокой колониеобразующей способностью. Читать полностью »