Используя методические приемы, Barr и сотрудники (1975) на основании ранее описанного метода образования гранулоцнтов и макрофагов в диффузионных камерах для изучения клеток крови мышей провели исследования с целью выявления стволовых кроветворных клеток человека. Ими предложена модель культивирования кроветворных клеток человека в диффузионных камерах в организме мышей после летального их облучения. Используя концентраты стволовых кроветворных клеток человека и суспензии очищенных фракций Т- и В-лимфоцитов, авторы показали, что большинство стволовых клеток находится в S-фазе. Жизнеспособные Т-лимфоциты стимулировали их пролиферацию, что свидетельствует о возможной физиологической роли активности лимфоцитов в регуляции гемопоэза. Читать полностью »
Наряду с обнаружением маркерных лейкозных клеток для их выявления проводятся поиски других отличительных признаков. В последнее время для этого используют различные приемы фракционирования клеток, сравнения их по плотности. В таких исследованиях (Мур, Меткалф, 1973) выявлены отличия лейкозных клеток при фракционировании их в линейных плотностных градиентах. Лейкозные колониеобразующие клетки располагаются в основном в легких областях градиента. Поскольку этот сдвиг отличается постоянством и не выявляется при лейкемоидных реакциях, его предлагают использовать как дифференцирующий признак. Интересны данные о том, что при лечении лейкозные клетки-предшественники с низкой плотностью исчезают из крови. Во время ремиссии при лейкозе наряду с нормальными колониеобразующими клетками сохраняются лейкозные, что рассматривается с точки зрения наличия конкурирующих клонов клеток при обострении и ремиссии, а также восстанавливается популяция нормальных стволовых клеток. Исследователи в этой области приходят к единому мнению, что при успешном лечении возникает ремиссия и особенности роста клеток-предшественников в культуре ткани приближаются к норме. Читать полностью »
В связи с открывшимися большими возможностями современной науки следует признать правильной существующую тенденцию многих ученых, нацеленную на попытки идентификации стволовых клеток и клеток-предшественников. Решение этого вопроса находится не пути дальнейшего усовершенствования цитологических и молекулярно-биологических методических приемов, дающих возможность получать фракции, сознательно обогащенные стволовыми клетками, и изучать их на ультраструктурном и ультрацитохимическом уровнях, внедрение в практику гематологических исследований электронной микроскопии, ультраструктурной цитохимии и электронно-микроскопической иммунологии приобрело огромное значение. Благодаря этим методам стало возможным идентифицировать кровяные клетки на уровне их органоидов - величины, расположения, субмикроскопического строения, а также внутриклеточного обмена, наличия или отсутствия рецепторов или маркеров. Разработанные в самые последние годы методы трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии с использованием различных иммунологических меток следует считать чрезвычайно перспективными для решения рассматриваемого вопроса. Читать полностью »
Дальнейшие перспективы морфологического изучения кроветворных клеток-предшественников связаны с совершенствованием методических приемов, открывших новые возможности для их распознавания. Это прежде всего разработка более эффективных методов обогащения кроветворных органов стволовыми клетками с помощью различных химических и физических воздействий; усовершенствование методических приемов разделения клеток костного мозга, лимфоидных органов, крови с целью получения фракций, максимально обогащенных колониеобразующими клетками; разработка н использование различных маркеров для специфической метки стволовых и коммитированных клеток-предшественников; устранение клеток, морфологически сходных со стволовыми, при сохранении последних с помощью различных физических, гормональных и других воздействий; применение новейших методов трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии высокой разрешающей способности, цитохимии, ультрацитохимии, авторадиографии и иммунологии для распознавания кроветворных клеток и изучения их свойств. Читать полностью »
В последние годы обнаружено биологическое действие на клетки и вирусы препаратов гистонов, выделенных из нормальных клеток. Гистоны - основные ядерные белки, участвующие в регуляции активности генов. Являясь репрессорами ДНК-зависимого синтеза РНК они способны подавлять транскрипцию в ядрах клеток. Поэтому можно считать перспективным получение и изучение влияния на дифференциацию и рост лейкозных клеток специфических гистоновых фракций, например фракции Hg, выделенной из ядерных эритроцитов кур. учитывая их преобладание в зрелых клетках эритроидного ряда, возможно специфическое их использование для ограничения генетической информации и воздействия на рост и размножение соответствующих лейкозных клеток, В наших экспериментах, проведенных на модели эритромиелоза крыс, выявлено торможение роста трансплантированных лейкозных клеток у животных и признаки их дифференциации в культуре ткани (Бутенко и др., 1974; Шляховенко и др., 1975; Черная и др., 1977) под влиянием гистона Н . Читать полностью »
В ряде работ (Worton е. а,, 1969; Moore е. я,, 1974) подробно описываются методы разделения клеток костного мозга в норме и патологии, М. Мур и Д. Меткалф (1973) подчеркивают, что наиболее эффективный путь выявления свойств клеток и различий между клеточными популяциями - это их физическое разделение, С помощью этих методов (Worton е. а,, 1969) удается отделить стволовые кроветворные клетки костного мозга, дающие образование колоний в селезенке летально облученных животных от колониеобразующих клеток культур. Клетки разделяли на несколько фракций в зависимости от их плотности путем центрифугирования в линейном градиенте плотности 14-37%-иого бычьего сывороточного альбумина (V фракция). В результате подсчета в каждой фракции общего количества клеток и отдельно КОЕ дана (Hyp, Меткалф, 1973) характеристика колониеобразующих клеток культур по плотности и по величине. Читать полностью »
Однако морфологическая идентификация полипотентных стволовых клеток оказалась делом чрезвычайно сложным. Прежде всего это объясняется очень низким содержанием данного вида клеток даже в основном источнике их образования - костном мозге, а также непригодностью обычных гематологических методик для их распознавания. Попытки идентификации родоначальных кроветворных клеток имеют свою историю. Первоначально поиски их носили случайный характер. Только в последние годы благодаря достижениям иммунологии биохимии и цитологии созданы серьезные предпосылки для разработки данной проблемы. Читать полностью »